ADAM9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403665-ACT

ADAM9 codifica uma metaloprotease-disintegrina transmembranar que regula o shedding (clivagem) do ectodomínio de proteínas de membrana e a remodelação do ambiente pericelular. Por meio do processamento proteolítico de precursores de fatores de crescimento e de moléculas de adesão, o ADAM9 influencia interações célula–célula e célula–matriz, a sinalização de receptores e a proteostase, conectando-se a vias associadas à sinalização EGFR/ERBB, à adesão mediada por integrinas e a programas migratórios. A atividade e a expressão desreguladas de ADAM9 têm sido associadas a fenótipos invasivos, microambientes inflamatórios e alterações na remodelação tecidual, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de biologia tumoral e de processos de remodelação relacionados a doenças crônicas.

ADAM9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAM9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAM9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAM9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAM9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAM9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAM9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAM9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAM9 em células tumorais com expressão de ADAM9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.