ADAM4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418990

Descripción general

Adam4 codifica ADAM4, un miembro de la familia ADAM (desintegrina y metaloproteasa) implicada en la proteólisis proximal a la membrana y en las interacciones célula–célula o célula–matriz. Las proteínas ADAM pueden modular el desprendimiento (shedding) del dominio extracelular de receptores de superficie y moléculas de adhesión, influyendo en la dinámica de la señalización, las señales inflamatorias y la remodelación tisular. En sistemas murinos, ADAM4 se estudia en el contexto de la regulación dependiente de proteasas de procesos del desarrollo y reproductivos, así como de la regulación del microambiente sobre el comportamiento celular. La desregulación de la proteólisis mediada por la familia ADAM es ampliamente relevante para la remodelación patológica y la señalización aberrante, proporcionando un punto de entrada mecanístico para desentrañar fenotipos impulsados por proteasas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ADAM4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adam4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adam4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adam4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ADAM4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adam4 para la investigación de la señalización de ADAM4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adam4 críticos para la función de ADAM4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adam4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ADAM4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ADAM4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adam4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ADAM4 (m) y el plásmido HDR ADAM4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adam4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adam4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.