Partículas Lentivirales de Activación (h) ADAM15: sc-405627-LAC

ADAM15 codifica una metaloproteasa-disintegrina anclada a la membrana que modula las interacciones célula–célula y célula–matriz mediante el desprendimiento proteolítico (shedding) y la interacción con integrinas. La actividad de ADAM15 influye en redes de señalización vinculadas a la adhesión y la motilidad, incluidas la dinámica de las adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y el ajuste de las vías de receptores de factores de crecimiento a través del procesamiento del ectodominio de proteínas de superficie. Se expresa en múltiples tejidos y se ha estudiado en contextos de inflamación, biología vascular e invasión de células tumorales, donde la alteración de la actividad proteasa y de la señalización de adhesión contribuye a fenotipos asociados a enfermedad. Estas propiedades hacen de ADAM15 un nodo útil para analizar la regulación dependiente de proteasas de la migración, la función de barrera y las interacciones con el microambiente en modelos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ADAM15 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ADAM15 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ADAM15 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ADAM15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ADAM15. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ADAM15 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.