ADAM15 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405627-ACT

ヒトADAM15は、膜アンカー型のメタロプロテアーゼ・ディスインテグリン（ADAM）ファミリーに属するタンパク質をコードしており、タンパク質分解によるシェディングと、細胞—細胞相互作用および細胞—細胞外マトリックス相互作用を統合する役割を担います。ADAM15は、一部の細胞表面タンパク質のエクトドメイン切断に関与し、インテグリン依存的な接着を調節することで、細胞骨格の再編、遊走、炎症性シグナル伝達プログラムに影響を与えます。これらの作用を通じて、ADAM15は細胞外マトリックスのターンオーバー、血管新生応答、ならびに細胞表面における受容体シグナル伝達動態に関連する経路に影響し得ます。ADAM15の発現異常は、腫瘍の進行や浸潤性表現型、さらに血管系および炎症性の病態生物学と関連づけられており、微小環境に駆動されるシグナル伝達の機序研究において重要です。

ADAM15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADAM15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADAM15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADAM15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADAM15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADAM15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADAM15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADAM15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADAM15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADAM15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。