Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAM15: sc-405627-ACT

Le gène humain **ADAM15** code une protéine de la famille **ADAM** (métalloprotéase-disintégrine) ancrée à la membrane, qui coordonne le clivage protéolytique (« shedding ») avec les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. ADAM15 contribue au clivage de l’ectodomaine de certaines protéines de surface et module l’adhérence dépendante des intégrines, influençant le remodelage du cytosquelette, la migration et les programmes de signalisation inflammatoire. Par ces activités, ADAM15 peut affecter des voies liées au renouvellement de la matrice extracellulaire, aux réponses angiogéniques et à la dynamique de signalisation des récepteurs à la surface cellulaire. Une expression dérégulée d’ADAM15 a été associée à la progression tumorale et à des phénotypes invasifs, ainsi qu’à la physiopathologie vasculaire et inflammatoire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation induite par le microenvironnement.

ADAM15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAM15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAM15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAM15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAM15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAM15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAM15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAM15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAM15 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAM15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.