ADAM12 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402583-ACT

ADAM12 codifica uma metaloprotease-disintegrina ancorada à membrana (ADAM12) que regula as interações célula–célula e célula–matriz por meio do shedding do ectodomínio de proteínas de superfície e da modulação da sinalização de adesão. Ela participa de processos como remodelação da matriz extracelular, miogênese e crosstalk da sinalização por fatores de crescimento, influenciando vias como EGFR/ERBB e a atividade da rede de TGF-β por meio do processamento proteolítico de substratos associados à membrana. A expressão e a atividade de ADAM12 têm sido associadas a alterações em programas celulares de migração, invasão e diferenciação em contextos de fibrose e biologia do câncer. Essas propriedades tornam a ADAM12 um alvo útil para estudar sinalização dependente de proteases, remodelação estromal e mecanismos de desenvolvimento tecidual em modelos de células humanas.

ADAM12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADAM12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ADAM12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADAM12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADAM12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ADAM12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADAM12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ADAM12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ADAM12 em células tumorais com expressão de ADAM12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.