Plasmide Double Nickase (m) ACTR-IIB: sc-418977-NIC

Acvr2b code le récepteur de l’activine de type IIB (ACTR-IIB), une kinase transmembranaire sérine/thréonine qui se lie à des ligands de la superfamille du TGF-β tels que la myostatine (GDF8), les activines et d’autres facteurs de croissance apparentés. Après liaison du ligand, ACTR-IIB forme des complexes de signalisation avec des récepteurs de type I afin d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD2/3, qui régulent la masse musculaire squelettique, la biologie du tissu adipeux, la fibrose et la différenciation cellulaire. Dans les modèles murins, la signalisation d’Acvr2b est largement utilisée pour étudier le contrôle de la croissance tissulaire et le remodelage des tissus au sein des voies musculaires et métaboliques, ainsi que des réponses inflammatoires et de matrice extracellulaire dépendantes du contexte. Une activité dérégulée de la voie ACTR-IIB a été associée à des phénotypes d’atrophie musculaire et à une homéostasie énergétique altérée, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques dans des modèles de maladies neuromusculaires et métaboliques.

ACTR-IIB Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Acvr2b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Acvr2b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Acvr2b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Acvr2b.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.