ACTR-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418974

概要

Acvr1 は、TGF-βスーパーファミリーに属するI型セリン／スレオニンキナーゼ受容体である activin A receptor type I（ACTR-I/ALK2）をコードし、BMPおよびアクチビンリガンドのシグナルを下流のSMAD1/5/8と、SMAD依存的な転写プログラムへ伝達する。マウス細胞では、ACTR-Iは受容体複合体のシグナルと状況依存的なフィードバック制御因子を統合することで、発生パターニング、骨芽細胞・軟骨細胞への分化、ならびに組織恒常性の調節に寄与する。ACVR1経路の攪乱は、BMPシグナルの異常亢進と不適切な細胞運命決定に関連し、骨格生物学、線維化様リモデリング、さらにMAPKやPI3K/AKT経路とのシグナル伝達クロストークの研究において重要である。Acvr1機能の実験的解析は、生理条件および疾患モデルの文脈で、受容体キナーゼ活性、リガンド特異性、下流の転写ネットワークに関する機序解明を支える。

ACTR-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAcvr1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Acvr1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Acvr1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACTR-Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACTR-Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Acvr1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACTR-Iの機能に不可欠なAcvr1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Acvr1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACTR-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびACTR-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Acvr1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACTR-I HDRプラスミド（m）および ACTR-I HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAcvr1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAcvr1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。