ACTL7A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-418969

Panoramica

Actl7a codifica ACTL7A, una proteina simile all’actina con espressione arricchita nella linea germinale maschile, che contribuisce al rimodellamento del citoscheletro durante la differenziazione degli spermatidi. ACTL7A è associata a processi actina-dipendenti che modellano l’architettura della testa dello spermatide, la formazione dell’acrosoma e l’assemblaggio del citoscheletro perinucleare, coordinando i cambiamenti strutturali necessari alla maturazione degli spermatozoi. L’alterazione di questi programmi citoscheletrici può compromettere la spermiogenesi, ridurre la funzionalità degli spermatozoi e contribuire a fenotipi di infertilità maschile in sistemi modello. In quanto membro della famiglia dell’actina con espressione prevalentemente testicolare, Actl7a è spesso studiato nei pathway che regolano lo sviluppo delle cellule germinali e l’idoneità riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTL7A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Actl7a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Actl7a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Actl7a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACTL7A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Actl7a per lo studio della segnalazione di ACTL7A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Actl7a critici per la funzione di ACTL7A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Actl7a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACTL7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACTL7A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Actl7a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACTL7A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACTL7A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Actl7a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Actl7a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.