Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTL7A (m): sc-418969

Présentation

Actl7a code ACTL7A, une protéine de type actine dont l’expression est enrichie dans la lignée germinale mâle et qui contribue au remodelage du cytosquelette lors de la différenciation des spermatides. ACTL7A est associée à des processus dépendants de l’actine qui façonnent l’architecture de la tête des spermatides, la formation de l’acrosome et l’assemblage du cytosquelette périnucléaire, en coordonnant les changements structuraux nécessaires à la maturation des spermatozoïdes. La perturbation de ces programmes cytosquelettiques peut altérer la spermiogenèse, diminuer la fonction spermatique et contribuer à des phénotypes d’infertilité masculine dans des systèmes modèles. En tant que membre de la famille des actines à expression préférentielle dans le testicule, Actl7a est couramment étudié dans les voies qui régissent le développement des cellules germinales et l’aptitude reproductive.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTL7A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Actl7a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Actl7a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Actl7a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTL7A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Actl7a pour l'étude de la signalisation de ACTL7A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Actl7a essentiels à la fonction de ACTL7A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Actl7a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTL7A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACTL7A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Actl7a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTL7A plasmide HDR (m) et le ACTL7A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Actl7a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Actl7a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.