ACTA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418964

Übersicht

Acta1 kodiert ACTA1, die in der Skelettmuskulatur vorherrschende sarcomerische α‑Actin-Isoform. Dort polymerisiert sie zu dünnen Filamenten, die an Z‑Scheiben verankert sind und eine aktomyosinbasierte Kontraktion ermöglichen. ACTA1 verknüpft die Organisation des strukturellen Zytoskeletts mit calciumregulierter kontraktiler Signalübertragung und unterstützt die Myofibrillogenese, die Aufrechterhaltung der Sarkomerstruktur sowie die mechanische Kraftübertragung. Eine veränderte ACTA1-Funktion stört die Integrität und Kontraktilität von Muskelfasern und ist mit kongenitalen Myopathien assoziiert, was ACTA1 zu einem zentralen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Defekten der Sarkomerassemblierung und Mechanismen der Muskeldegeneration in vivo und in vitro macht. In Mausmodellen dient Acta1 als wichtiger Marker und funktioneller Determinant der Skelettmuskeldifferenzierung, des Faser-Typ-Remodelings und von Stressantworten auf mechanische Belastung.

Das ACTA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acta1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acta1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acta1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACTA1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acta1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACTA1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acta1-Exone abzielen, die für die ACTA1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acta1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACTA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACTA1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acta1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACTA1 HDR-Plasmid (m) und ACTA1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acta1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acta1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.