Plasmide CRISPR/Cas9 KO Acrp30 (m): sc-418962

Présentation

Adipoq code pour Acrp30 (adiponectine), une hormone sécrétée par les adipocytes, qui circule sous forme de multimères et régule l’équilibre énergétique systémique. Acrp30 transmet ses signaux principalement via ADIPOR1/ADIPOR2 afin de moduler les voies AMPK et PPARα, influençant l’oxydation des acides gras, l’utilisation du glucose et la biogenèse mitochondriale ; elle peut également façonner le tonus inflammatoire par ses effets sur la signalisation associée à NF-κB. Dans des modèles murins, une expression altérée d’Adipoq est liée à une dysfonction du tissu adipeux, à la résistance à l’insuline, à la stéatose hépatique et à des phénotypes associés à l’athérosclérose. Ces propriétés font d’Adipoq un nœud clé pour l’étude de la signalisation des adipokines, du dialogue métabolique entre tissu adipeux et foie/muscle, et de l’intégration inflammation–métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Acrp30 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adipoq dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adipoq, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adipoq à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Acrp30.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adipoq pour l'étude de la signalisation de Acrp30, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adipoq essentiels à la fonction de Acrp30
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adipoq pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Acrp30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Acrp30 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adipoq. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Acrp30 plasmide HDR (m) et le Acrp30 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adipoq pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adipoq définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.