Plasmide Double Nickase (h) ACOT8: sc-407262-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ACOT8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ACOT8 Double Nickase (h) et le plasmide ACOT8 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ACOT8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ACOT8 Antibody (C-3): sc-7343
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ACOT8 | sc-407262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ACOT8 | sc-407262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACOT8 code l’acyl‑CoA thioestérase 8, une enzyme peroxysomale qui hydrolyse les thioesters d’acyl‑CoA en acides gras libres et en coenzyme A, contribuant ainsi à réguler la disponibilité de la CoA intraperoxysomale et la taille du pool d’acyl‑CoA. En modulant le flux de substrats au travers de la β‑oxydation peroxysomale et du remodelage lipidique, ACOT8 participe à l’homéostasie lipidique cellulaire et à l’équilibre rédox. Son activité s’inscrit dans des processus plus larges associés aux peroxysomes, notamment la prise en charge des acides gras à très longue chaîne et la coordination avec l’oxydation mitochondriale des acides gras. La dérégulation des voies du métabolisme lipidique peroxysomal impliquant ACOT8 a été étudiée dans le contexte de phénotypes métaboliques et inflammatoires, où une utilisation modifiée des acides gras et le stress oxydant jouent un rôle.
ACOT8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACOT8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACOT8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACOT8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACOT8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.