Plasmide CRISPR d'Activation (m) ACE2: sc-427594-ACT

Chez la souris, Ace2 code l’enzyme de conversion de l’angiotensine 2 (ACE2), une carboxypeptidase dépendante du zinc qui contrebalance le système rénine–angiotensine en convertissant l’angiotensine II en angiotensine-(1–7), orientant ainsi la signalisation vers l’axe du récepteur Mas. En modulant la disponibilité des peptides de l’angiotensine, ACE2 influence les voies de signalisation MAPK, PI3K/AKT, de l’oxyde nitrique et de l’inflammation, qui façonnent le tonus vasculaire, le stress oxydatif et le remodelage tissulaire. Dans plusieurs organes, notamment le poumon, le cœur, le rein et l’intestin, l’activité d’ACE2 est associée à des phénotypes cardiopulmonaires et métaboliques, à des réponses fibrosantes et à l’activation immunitaire dans des modèles précliniques. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’Ace2 sont donc fréquemment étudiées dans les travaux portant sur les lésions d’organes cibles liées à l’hypertension, les atteintes pulmonaires aiguës et chroniques, et l’inflammation systémique.

ACE2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ace2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACE2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ace2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ace2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACE2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ace2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACE2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACE2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ace2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.