ACCβ Double Nickase Plasmid (h): sc-401903-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACCβ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACCβ Double-Nickase-Plasmid (h) und ACCβ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACACB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACCβ: sc-377313
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACCβ Double Nickase Plasmid (h) | sc-401903-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACCβ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401903-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACACB kodiert die Acetyl-CoA-Carboxylase beta (ACCβ), eine biotinabhängige Carboxylase, die an der äußeren Mitochondrienmembran die Bildung von Malonyl-CoA katalysiert. Durch die Kontrolle der Malonyl-CoA-Spiegel reguliert ACCβ die β-Oxidation von Fettsäuren über die Hemmung von CPT1 und verknüpft damit Nährstoffsensorik mit der mitochondrialen Brennstoffauswahl und der zellulären Energiehomöostase. Die Aktivität von ACACB ist in die AMPK-Signalübertragung, insulinresponsive Stoffwechselprogramme und Lipidverarbeitungswege eingebunden, die den oxidativen Stoffwechsel in Muskel und anderen Geweben prägen. Eine dysregulierte ACCβ-Funktion und ein veränderter Malonyl-CoA-Fluss sind mit Stoffwechselphänotypen assoziiert, die für Adipositas, Insulinresistenz und die Biologie der Fettleber relevant sind, und stützen mechanistische Untersuchungen zu lipidgetriebenem zellulärem Stress und Entzündung.
ACCβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACACB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACACB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACACB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACACB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.