Plásmido CRISPR de Activación (h) ACADVL (VLCAD): sc-403111-ACT

ACADVL codifica la acil‑CoA deshidrogenasa de cadena muy larga (VLCAD), una flavoproteína mitocondrial que cataliza el paso inicial de deshidrogenación en la β‑oxidación de acil‑CoA de ácidos grasos de cadena larga. La actividad de VLCAD contribuye a la homeostasis energética celular al acoplar el catabolismo de ácidos grasos con la transferencia de electrones a través de ETF/ETFDH y la posterior fosforilación oxidativa, especialmente en tejidos de alta demanda energética como el corazón y el músculo esquelético. Las alteraciones en la expresión o función de ACADVL perturban la oxidación mitocondrial de ácidos grasos, favorecen la acumulación de acilcarnitinas de cadena larga y comprometen la flexibilidad metabólica durante el ayuno o ante un aumento de la demanda energética. En consecuencia, ACADVL se estudia ampliamente en el contexto de trastornos hereditarios de la oxidación de ácidos grasos y de una disfunción metabólica mitocondrial más amplia, relevante para fenotipos cardiometabólicos y miopáticos.

ACADVL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACADVL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ACADVL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACADVL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACADVL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ACADVL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACADVL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ACADVL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ACADVL en células tumorales con expresión de ACADVL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.