Plasmide CRISPR/Cas9 KO ABR (m): sc-430977

Présentation

Abr code pour ABR, une protéine activatrice de l’activité GTPase (GTPase-activating protein, RhoGAP) de la famille Rho, qui atténue la signalisation de petites GTPases telles que Rac et Cdc42, modulant ainsi le remodelage du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et la migration. Dans les cellules murines, ABR contribue à la régulation de la dynamique de l’actine et des voies en aval liées au trafic des cellules immunitaires et aux réponses inflammatoires. Par son contrôle négatif des cascades de signalisation dépendantes des GTPases, ABR influence des processus incluant l’endocytose, la polarité cellulaire et la signalisation en réponse au stress. Une signalisation des GTPases Rho dérégulée est largement impliquée dans des phénotypes caractérisés par une motilité et une organisation tissulaire anormales, faisant d’Abr un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur l’équilibre des réseaux de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ABR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Abr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Abr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Abr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ABR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Abr pour l'étude de la signalisation de ABR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Abr essentiels à la fonction de ABR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Abr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ABR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ABR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Abr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ABR plasmide HDR (m) et le ABR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Abr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Abr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.