ABHD14B Lentiviral Activation Particles (h): sc-410211-LAC

ABHD14B (abhydrolase domain containing 14B) kodiert ein Protein aus der Familie der Serin-Hydrolasen, das über die Hydrolyse von Ester-/Amidbindungen an der Regulation des zellulären Lipid- und Kleinmolekülstoffwechsels beteiligt ist. Als Mitglied der α/β-Hydrolase-Fold-Superfamilie kann ABHD14B die metabolische Homöostase, die organellenassoziierte Lipidverarbeitung und nachgeschaltete Signalprozesse beeinflussen, die sich mit Stressantworten und entzündlichen Signalwegen überschneiden können. Expressionsunterschiede und funktionelle Variationen von Enzymen der ABHD-Familie wurden mit veränderter Bioenergetik und Remodeling von Membranlipiden in Verbindung gebracht – Merkmale, die häufig bei metabolischen Störungen und krebsrelevanten zellulären Zuständen beobachtet werden. Entsprechend stellt ABHD14B einen gut zugänglichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien dar, die die Hydrolaseaktivität mit phänotypischen Effekten auf Signalweg-Ebene in humanen Zellmodellen verknüpfen.

ABHD14B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ABHD14B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ABHD14B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ABHD14B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ABHD14B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ABHD14B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.