ABCG2 Double Nickase Plasmid (h): sc-416737-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ABCG2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ABCG2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ABCG2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABCG2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ABCG2: sc-377176
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ABCG2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416737-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ABCG2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416737-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCG2 (auch als BCRP bekannt) kodiert einen ATP-bindenden ABC-Effluxtransporter, der die intrazelluläre Anreicherung verschiedenster Xenobiotika und endogener Metabolite begrenzt. In Barrieregeweben sowie in stammzellähnlichen Zellpopulationen an der Plasmamembran lokalisiert, trägt ABCG2 durch ATP-abhängigen Substratexport zum epithelialen Transport, zur zellulären Entgiftung und zum Schutz vor oxidativem und chemischem Stress bei. Seine Aktivität ist mit der pharmakokinetischen Verarbeitung und Stressantwort-Programmen verknüpft, indem es die intrazelluläre Exposition gegenüber kleinen Molekülen und porphyrinassoziierten Metaboliten moduliert. Eine dysregulierte Expression oder Funktion von ABCG2 wird häufig im Kontext von Multidrug-Resistance-Phänotypen, der Biologie von Gewebebarrieren und Tumorheterogenität sowie von erblichen Varianten untersucht, die die Transporteraktivität beeinflussen.
ABCG2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABCG2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABCG2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABCG2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABCG2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.