Plásmido CRISPR de Activación (h) 5α-Reductase 2: sc-402353-ACT

SRD5A2 codifica la 5α-reductasa 2 humana, una oxidorreductasa dependiente de NADPH que convierte la testosterona en el andrógeno más potente dihidrotestosterona (DHT), modulando la señalización del receptor de andrógenos en tejidos sensibles a andrógenos. Este paso enzimático es central en el metabolismo de las hormonas esteroideas e influye en programas transcripcionales que gobiernan la diferenciación sexual, la homeostasis epitelial y la biología reproductiva. Las alteraciones en la actividad de SRD5A2 se han relacionado con trastornos del metabolismo de andrógenos y del desarrollo genital, y la señalización androgénica desregulada es relevante para la biología prostática y la remodelación tisular impulsada por hormonas. Por ello, SRD5A2 se estudia ampliamente en la regulación endocrina, el flujo de las vías esteroidogénicas y los fenotipos celulares dependientes de andrógenos.

5α-Reductase 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRD5A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

5α-Reductase 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRD5A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRD5A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de 5α-Reductase 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRD5A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de 5α-Reductase 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía 5α-Reductase 2 en células tumorales con expresión de SRD5A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.