3β-HSD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420970

Übersicht

Das murine Gen Hsd3b6 kodiert 3β-HSD6, eine Hydroxysteroid-Dehydrogenase, die zentrale Redoxschritte in der Biosynthese von Steroidhormonen katalysiert, indem sie 3β‑Hydroxysteroide und 3‑Ketosteroide ineinander umwandelt. Diese Aktivität unterstützt den steroidogenen Stofffluss und trägt zur Aufrechterhaltung der zellulären Steroidhomöostase bei, was nachgeschaltete nukleäre Rezeptorsignale und umfassendere, endokrin regulierte Transkriptionsprogramme beeinflusst. Eine veränderte Funktion der 3β‑HSD-Familie kann die Pools von Androgen-, Östrogen- und Kortikosteroidvorstufen verschieben und verknüpft diesen enzymatischen Knotenpunkt mit Studien zur Reproduktionsbiologie, zur Physiologie von Nebenniere und Gonaden sowie zur metabolischen Regulation. Hsd3b6 ist daher relevant, um zu untersuchen, wie steroidogene Enzyme gewebespezifische Signalnetzwerke und Phänotypen in Mausmodellsystemen prägen.

Das 3β-HSD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hsd3b6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hsd3b6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hsd3b6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die 3β-HSD6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hsd3b6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der 3β-HSD6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hsd3b6-Exone abzielen, die für die 3β-HSD6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hsd3b6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom 3β-HSD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom 3β-HSD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hsd3b6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das 3β-HSD6 HDR-Plasmid (m) und 3β-HSD6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hsd3b6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hsd3b6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.