Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
20S Proteasome β5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402449
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- 20S Proteasome β5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico 20S Proteasome β5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 20S Proteasome β5 Anticuerpo (A-10): sc-393931
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
20S Proteasome β5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402449 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PSMB5 codifica la subunidad catalítica β5 del proteasoma central 20S, que aporta la actividad tipo quimotripsina esencial para la degradación de proteínas dependiente de ATP por el sistema ubiquitina–proteasoma. Esta vía proteolítica regula el control de calidad proteica, el procesamiento de antígenos para su presentación por el MHC de clase I y el recambio de reguladores clave del ciclo celular y de la respuesta al estrés. La alteración de la función del proteasoma se ha vinculado con una proteostasis desregulada, señalización de estrés oxidativo y del retículo endoplásmico (RE), y cambios en las vías de NF-κB y de apoptosis. PSMB5 también se estudia en contextos como la señalización proliferativa y las respuestas a la inhibición del proteasoma, donde la actividad de β5 puede influir en la sensibilidad celular y en fenotipos de resistencia.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO 20S Proteasome β5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PSMB5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PSMB5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PSMB5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína 20S Proteasome β5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PSMB5 para la investigación de la señalización de 20S Proteasome β5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PSMB5 críticos para la función de 20S Proteasome β5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PSMB5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido 20S Proteasome β5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido 20S Proteasome β5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PSMB5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR 20S Proteasome β5 (h) y el plásmido HDR 20S Proteasome β5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PSMB5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PSMB5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.