Plasmide CRISPR d'Activation (h) 20S Proteasome α2: sc-401450-ACT

PSMA2 code la sous-unité α2 du protéasome humain 20S, un composant central du protéasome 26S qui s’assemble au sein de l’anneau α du cylindre catalytique 20S et contribue à réguler l’entrée des substrats ainsi que la stabilité du complexe. Via le système ubiquitine–protéasome, PSMA2 participe à la dégradation ATP‑dépendante des protéines mal repliées ou à courte durée de vie, modulant la protéostasie, la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et le traitement des antigènes. L’activité du protéasome s’articule avec la signalisation NF‑κB, les réponses aux dommages de l’ADN et la dégradation régulée de régulateurs transcriptionnels et du cycle cellulaire clés. Un dysfonctionnement du protéasome est impliqué dans des états de stress protéotoxique et a été associé à la signalisation oncogénique ainsi qu’à des voies liées à la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de l’homéostasie protéique.

20S Proteasome α2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

20S Proteasome α2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de 20S Proteasome α2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de 20S Proteasome α2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie 20S Proteasome α2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.