Plásmido Doble Nickase (h) 15-LO2: sc-404699-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)15-LO2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa 15-LO2 (h) y el plásmido de doble nickasa 15-LO2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ALOX15B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 15-LO2 Anticuerpo (F-10): sc-376795
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) 15-LO2 | sc-404699-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) 15-LO2 | sc-404699-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **ALOX15B** codifica la **15-lipooxigenasa-2 (15-LO2)**, una dioxigenasa con hierro no hemo que oxigena ácidos grasos poliinsaturados para generar mediadores lipídicos bioactivos, como **15-HETE** a partir del ácido araquidónico. Mediante la regulación de las redes de eicosanoides y de mediadores especializados pro-resolutivos, la 15-LO2 influye en la señalización inflamatoria, la diferenciación epitelial, la homeostasis redox y la remodelación de los lípidos de membrana. La actividad de ALOX15B se entrecruza con el metabolismo del ácido araquidónico, la señalización de PPAR y vías impulsadas por citocinas que modelan las respuestas tisulares al daño y a las señales inmunitarias. La expresión desregulada o perfiles alterados de productos lipídicos se han asociado con patologías vinculadas a la inflamación y con cambios relacionados con el cáncer en el comportamiento de las células epiteliales, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de señalización lipídica.
15-LO2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALOX15B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALOX15B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALOX15B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALOX15B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.