15-LO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419090

Übersicht

Alox8 kodiert die Arachidonat-15-Lipoxygenase 2 (15-LO2), eine nicht-hämhaltige Eisen-Dioxygenase, die mehrfach ungesättigte Fettsäuren oxygeniert und dadurch bioaktive Lipidmediatoren erzeugt. In Mausgeweben können von 15-LO2 abgeleitete Oxylipine das Redoxgleichgewicht, das Remodelling von Membranlipiden sowie entzündliche Signalwege über Netzwerke aus Eicosanoiden und Lipidperoxidation modulieren. Die Aktivität von Alox8 greift in angeborene Immunwege und die Biologie epithelialer Barrieren ein, indem sie lokale Mediatorprofile formt, die die Zytokinproduktion und die Rekrutierung von Leukozyten beeinflussen. Eine fehlregulierte, lipoxygenaseabhängige Lipidsignalgebung wurde mit entzündlichen Phänotypen und Reaktionen auf metabolischen Stress in Verbindung gebracht, was Alox8 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung krankheitsrelevanter Lipidmediator-Schaltkreise macht.

Das 15-LO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Alox8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Alox8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Alox8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die 15-LO2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Alox8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der 15-LO2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Alox8-Exone abzielen, die für die 15-LO2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Alox8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom 15-LO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom 15-LO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Alox8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das 15-LO2 HDR-Plasmid (m) und 15-LO2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Alox8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Alox8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.