11β-HSD2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401400-NIC

HSD11B2は、ヒト11β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素2型（11β-HSD2）をコードする。11β-HSD2はNAD+依存性の酸化還元酵素であり、コルチゾールをコルチゾンへと不活化することで、グルココルチコイド過剰によるミネラルコルチコイド受容体シグナル伝達の攪乱を防ぐ。この酵素はステロイドホルモンの受容体前代謝における重要な規定因子で、腎臓や結腸を含むミネラルコルチコイド応答性上皮において電解質恒常性の維持に寄与する。HSD11B2の発現や活性の変化はコルチコステロイドシグナルの制御異常と関連し、見かけ上のミネラルコルチコイド過剰（apparent mineralocorticoid excess）に一致する表現型を示し得ることから、高血圧の生物学や内分泌調節の研究において重要である。さらに11β-HSD2は、局所のグルココルチコイド曝露量とそれに続く転写プログラムを形作る役割に着目して、胎盤や血管組織でも研究されている。

11β-HSD2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSD11B2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSD11B2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSD11B2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSD11B2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。