Plasmide Double Nickase (h) γ-GCSc: sc-401133-NIC

GCLC code la sous-unité catalytique de la ligase glutamate–cystéine (γ-GCSc), enzyme limitante de la biosynthèse du glutathion qui catalyse la formation du γ‑glutamylcystéine. En contrôlant les réserves cellulaires de glutathion, la γ‑GCSc soutient l’homéostasie rédox, la détoxification des électrophiles et le maintien de la capacité antioxydante mitochondriale et cytosolique, avec des effets en aval sur la signalisation sensible aux ROS et l’adaptation métabolique. L’activité de GCLC est étroitement régulée au sein des voies de réponse au stress oxydant, notamment via des programmes transcriptionnels dépendants de NRF2/KEAP1, et elle influence la susceptibilité à la ferroptose ainsi qu’à d’autres mécanismes de mort cellulaire induits par le stress. La dérégulation du métabolisme du glutathion dépendant de GCLC a été associée à des réponses modifiées au stress oxydant et aux xénobiotiques dans des contextes tels que les maladies hépatiques, la neurodégénérescence et la biologie des cancers.

γ-GCSc Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GCLC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GCLC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GCLC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GCLC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.