Plásmido Doble Nickase (h) γB-crystallin: sc-402939-NIC

CRYGB codifica la γB-cristalina humana, una proteína estructural del cristalino ocular, altamente abundante y de larga vida media, que contribuye al índice de refracción y a la transparencia del tejido mediante una arquitectura estable de dominios β/γ-cristalina. La γB-cristalina participa en la proteostasis de las células de fibras del cristalino y en la organización espacial de los ensamblajes de cristalinas, donde cambios en la solubilidad, la propensión a la agregación o las modificaciones postraduccionales pueden alterar la dispersión de la luz. La alteración de la homeostasis de las cristalinas está estrechamente vinculada a la biología de las cataratas, lo que convierte a CRYGB en un punto de entrada útil para estudiar la estabilidad proteica, el comportamiento de fases y las respuestas al estrés en modelos celulares relevantes para el cristalino. El análisis experimental de CRYGB respalda investigaciones sobre los mecanismos de agregación proteica y el mantenimiento de las propiedades ópticas bajo condiciones de envejecimiento y oxidativas.

γB-crystallin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRYGB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRYGB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRYGB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRYGB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.