Plasmide Double Nickase (h) γB-crystallin: sc-402939-NIC

CRYGB code la γB-cristalline humaine, une protéine structurale très abondante et à longue durée de vie du cristallin oculaire, qui contribue à l’indice de réfraction et à la transparence du tissu grâce à une architecture stable de domaines de type β/γ-cristalline. La γB-cristalline participe à la protéostase des cellules des fibres du cristallin ainsi qu’à l’organisation spatiale des assemblages de cristallines, où des modifications de solubilité, de propension à l’agrégation ou des modifications post-traductionnelles peuvent augmenter la diffusion de la lumière. La perturbation de l’homéostasie des cristallines est étroitement liée à la biologie de la cataracte, faisant de CRYGB un point d’entrée utile pour étudier la stabilité protéique, le comportement de phase et les réponses au stress dans des modèles cellulaires pertinents pour le cristallin. L’étude expérimentale de CRYGB soutient les recherches sur les mécanismes d’agrégation protéique et le maintien des propriétés optiques en conditions de vieillissement et de stress oxydant.

γB-crystallin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRYGB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRYGB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRYGB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRYGB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.