β-TrCP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400971

Descripción general

BTRC codifica la proteína con dominio F-box β-TrCP, un componente de reconocimiento de sustratos del complejo ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), que dirige motivos degrón fosforilados para su ubiquitinación y posterior degradación por el proteasoma. β-TrCP regula múltiples ejes de señalización, entre ellos la vía de NF-κB mediante el recambio de IκB, la vía Wnt/β-catenina a través de la degradación de β-catenina y el control del ciclo celular al modular proteínas como CDC25A y EMI1. A través de estas rutas, BTRC influye en la proliferación, las respuestas inflamatorias, la adaptación al daño del ADN y los programas epitelio–mesénquima. La actividad desregulada de β-TrCP se ha asociado con activación aberrante de vías e inestabilidad genómica en diversos contextos de investigación relacionados con el cáncer y el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β-TrCP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BTRC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BTRC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BTRC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β-TrCP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BTRC para la investigación de la señalización de β-TrCP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BTRC críticos para la función de β-TrCP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BTRC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β-TrCP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido β-TrCP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BTRC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β-TrCP (h) y el plásmido HDR β-TrCP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BTRC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BTRC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.