Plasmide CRISPR/Cas9 KO βENaC (m): sc-422826
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- βENaC Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique βENaC, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: βENaC Antibody (D-3): sc-25354
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO βENaC (m) | sc-422826 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Scnn1b code la sous-unité β murine du canal sodique épithélial (βENaC), un composant essentiel de l’absorption de Na⁺ sensible à l’amiloride à travers les membranes apicales des cellules épithéliales. Avec les sous-unités α et γ, βENaC contribue à réguler le transport transépithélial du sodium, l’hydratation du liquide de surface des voies aériennes et la physiologie de la barrière épithéliale. L’activité d’ENaC est strictement contrôlée par l’activation protéolytique, le trafic membranaire et le renouvellement dépendant de l’ubiquitine via la voie NEDD4L, reliant Scnn1b à l’homéostasie ionique et aux réponses épithéliales au stress. Les altérations de la fonction d’ENaC sont largement étudiées dans des modèles d’obstruction muqueuse des voies aériennes et de déficit de clairance mucociliaire, ainsi que dans la régulation rénale du sodium et de la pression artérielle.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO βENaC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Scnn1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Scnn1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Scnn1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine βENaC.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Scnn1b pour l'étude de la signalisation de βENaC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Scnn1b essentiels à la fonction de βENaC
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Scnn1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le βENaC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le βENaC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Scnn1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le βENaC plasmide HDR (m) et le βENaC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Scnn1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Scnn1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.