β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406310
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- β3Gn-T2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im β3Gn-T2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β3Gn-T2: sc-134231
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β3Gn-T2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406310 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
B3GNT2 kodiert die humane β3Gn-T2, eine β-1,3-N-Acetylglucosaminyltransferase, die im Golgi-Apparat poly-N-Acetyllactosamin-(polyLacNAc)-Ketten auf N- und O-Glykanen sowie auf ausgewählten Glykolipiden verlängert. Durch die Modulation der Verfügbarkeit von Glykan-Gerüsten für weiteres Branching und terminale Modifikationen (einschließlich Sialylierung und Fucosylierung) beeinflusst β3Gn-T2 Lektin-Interaktionen, Zell-Zell-Adhäsion und den Rezeptortransport. Diese Glykosylierungsaktivität ist in Biosynthesewege von Glykanen eingebettet, die die Stabilität von Membranproteinen und die Kommunikation mit der extrazellulären Matrix prägen. In der Literatur wurden veränderte polyLacNAc-Expression und B3GNT2-assoziierte Glykosylierungsmuster mit Änderungen des Verhaltens von Tumorzellen und der Immunerkennung in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen in Krebs- und Immunologiemodellen unterstützt.
Das β3Gn-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des B3GNT2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des B3GNT2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von B3GNT2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β3Gn-T2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von B3GNT2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β3Gn-T2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf B3GNT2-Exone abzielen, die für die β3Gn-T2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere B3GNT2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom β3Gn-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β3Gn-T2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des B3GNT2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β3Gn-T2 HDR-Plasmid (h) und β3Gn-T2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von B3GNT2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten B3GNT2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.