Plasmide CRISPR/Cas9 KO β2C Tubulin (h): sc-400056

Présentation

TUBB4B code la tubuline β2C, un composant central des hétérodimères α/β-tubuline qui polymérisent en microtubules afin de soutenir l’architecture du cytosquelette, le transport intracellulaire et l’assemblage du fuseau mitotique. Le remodelage dynamique des microtubules sous-tend des processus tels que la progression du cycle cellulaire, le positionnement des organites et la ciliogenèse, et s’articule avec des voies qui régulent la polarité et les réponses au stress. Des altérations de l’équilibre des isotypes de tubuline et de la dynamique des microtubules sont fréquemment associées à des phénotypes prolifératifs, à l’instabilité chromosomique et à des modifications du comportement migratoire observées dans de multiples contextes pathologiques. En tant que nœud structurel et régulateur de la biologie dépendante des microtubules, la tubuline β2C constitue une cible utile pour disséquer le contrôle cytosquelettique de la division cellulaire et du trafic intracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β2C Tubulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBB4B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBB4B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBB4B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β2C Tubulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBB4B pour l'étude de la signalisation de β2C Tubulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUBB4B essentiels à la fonction de β2C Tubulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBB4B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β2C Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β2C Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBB4B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β2C Tubulin plasmide HDR (h) et le β2C Tubulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBB4B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBB4B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.