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β2A TubulinCRISPR激活质粒(h) | sc-400054-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
β2A TubulinCRISPR激活质粒(h2) | sc-400054-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
TUBB2A 编码 β2A 微管蛋白(β2A Tubulin),它是 α/β-微管蛋白异二聚体的核心组成部分,可聚合形成微管,从而维持细胞骨架结构、细胞内运输以及有丝分裂纺锤体动力学。通过调控微管的生长与稳定性,β2A 微管蛋白经由微管依赖性通路参与神经元迁移、轴突导向和细胞周期进程等过程。在神经发育相关表型、染色体不稳定性以及异常细胞分裂等研究背景中,微管蛋白同工型表达改变或微管网络功能障碍常被重点关注。作为细胞骨架的枢纽,TUBB2A 为研究微管相关蛋白、马达蛋白运输以及与有丝分裂相关的信号通路提供了机制切入点。
β2A Tubulin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TUBB2A的表达。
β2A Tubulin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TUBB2A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TUBB2A转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性β2A Tubulin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TUBB2A位点,并能够研究内源性位点上依赖于β2A Tubulin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TUBB2A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟β2A Tubulin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。