Plásmido CRISPR de Activación (h) α_2B-AR: sc-403430-ACT

ADRA2B codifica el receptor adrenérgico humano α2B (α2B-AR), un receptor acoplado a proteína G de tipo alfa-2 que se acopla preferentemente a Gi/o para inhibir la adenilato ciclasa, reducir el AMPc intracelular y modular la señalización aguas abajo dependiente de PKA. La activación del receptor también involucra procesos vinculados a β-arrestina, la internalización y desensibilización del receptor, y puede influir en la actividad de la vía MAPK/ERK de manera dependiente del contexto. El α2B-AR contribuye a la regulación de la liberación de neurotransmisores, el tono del músculo liso vascular y las respuestas del sistema nervioso simpático mediante la detección de catecolaminas. La señalización adrenérgica desregulada en la que participa ADRA2B se ha asociado con fenotipos relevantes para la investigación cardiovascular y neuroconductual, lo que respalda su estudio en modelos de respuesta al estrés, regulación autonómica y sesgo de señalización del receptor.

α2B-AR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADRA2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α2B-AR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADRA2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADRA2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α2B-AR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADRA2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α2B-AR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α2B-AR en células tumorales con expresión de ADRA2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.