α_2A-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419023

Übersicht

Adra2a kodiert den murinen α2A-AR, einen Gi/Go-gekoppelten adrenergen Rezeptor, der auf Noradrenalin und Adrenalin reagiert, um die Adenylylcyclase zu hemmen und den intrazellulären cAMP-Spiegel zu senken. Über GPCR-Signalisierung moduliert der α2A-AR die Aktivität von Ionenkanälen, die präsynaptische Neurotransmitterfreisetzung sowie nachgeschaltete, PKA-abhängige Phosphorylierungsprogramme, die synaptische Übertragung und neuronale Erregbarkeit prägen. In peripheren Geweben trägt der α2A-AR zur Regulation des Sympathikustonus und zu katecholamin-gesteuerten zellulären Antworten bei. Eine fehlregulierte adrenerge Signalisierung unter Beteiligung von ADRA2A wurde mit neurobehavioralen Phänotypen und kardiometabolischen Merkmalen in Verbindung gebracht, wodurch dieser Rezeptor für Studien zur Regulation der Stressachse und der autonomen Physiologie relevant ist.

Das α2A-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adra2a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adra2a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adra2a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α2A-AR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adra2a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α2A-AR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adra2a-Exone abzielen, die für die α2A-AR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adra2a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α2A-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α2A-AR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adra2a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α2A-AR HDR-Plasmid (m) und α2A-AR HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adra2a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adra2a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.