Plásmido Doble Nickase (h) α1D-AR: sc-402904-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)α1D-AR consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa α1D-AR (h) y el plásmido de doble nickasa α1D-AR (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ADRA1D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: α1D-AR Anticuerpo (F-10): sc-390884
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) α1D-AR | sc-402904-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) α1D-AR | sc-402904-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADRA1D codifica el receptor adrenérgico humano α1D (α1D-AR), un receptor acoplado a proteína G que señaliza preferentemente a través de Gq/11 para activar la fosfolipasa C, elevar el Ca2+ intracelular y estimular programas transcripcionales dependientes de PKC. El α1D-AR contribuye a la contractilidad del músculo liso y al tono vascular, y modula la señalización MAPK/ERK aguas abajo, la actividad de canales iónicos y la expresión génica dependiente de Ca2+. La actividad del receptor integra señales de catecolaminas dentro de redes autonómicas de señalización y puede influir en programas de proliferación y remodelación celular en tejidos sensibles. La señalización adrenérgica desregulada que involucra a ADRA1D se ha investigado en la fisiología cardiovascular y urogenital y en contextos más amplios donde la señalización de Ca2+ impulsada por GPCR afecta la inflamación y las transiciones de estado celular.
α1D-AR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADRA1D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADRA1D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADRA1D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADRA1D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.