α_1D-AR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402904-ACT

ADRA1D kodiert den menschlichen α1D-adrenergen Rezeptor (α1D-AR), einen G‑Protein-gekoppelten Rezeptor, der vorwiegend an Gq/11 koppelt, um die Phospholipase C zu aktivieren, das intrazelluläre Ca2+ zu erhöhen und PKC-abhängige Signalwege zu stimulieren. Zu den nachgeschalteten Effekten gehören die Modulation von MAPK/ERK-Signalwegen sowie transkriptionelle Programme, die die Kontraktilität glatter Muskulatur, den Gefäßtonus und die autonome Neurotransmission regulieren. Die Aktivität des α1D-AR beeinflusst die kardiovaskuläre und urogenitale Physiologie und wird im Kontext fehlregulierter adrenerger Signalübertragung untersucht, wie sie mit Hypertonie, Funktionsstörungen der unteren Harnwege und anderen Erkrankungen mit veränderter Reaktivität glatter Muskulatur einhergeht. Expression und Signaldynamik von ADRA1D liefern zudem einen mechanistischen Readout für GPCR‑Trafficking, Desensitivierung und die Kopplung zwischen Rezeptor und Effektor in menschlichen Zellen.

α1D-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADRA1D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

α1D-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADRA1D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADRA1D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen α1D-AR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADRA1D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von α1D-AR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des α1D-AR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADRA1D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.