α_1B-AR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403295-ACT

ADRA1B kodiert den humanen α1B-AR (alpha-1B-adrenerger Rezeptor), einen katecholaminresponsiven GPCR, der hauptsächlich an Gq/11-Proteine koppelt und dadurch die Phospholipase C aktiviert, Inositolphosphat-Signalwege, die intrazelluläre Ca2+-Mobilisierung sowie PKC-(Proteinkinase-C-)abhängige Signalwege auslöst. Die Rezeptoraktivierung kann zudem MAPK/ERK-Signale einbinden und die Zytoskelettdynamik, Sekretion und kontraktile Antworten in adrenerg innervierten Geweben regulieren. Der α1B-AR trägt zur Kontrolle des Gefäßtonus und der Reaktivität glatter Muskulatur bei und beeinflusst die neuronale Erregbarkeit sowie stressresponsive Signalübertragung. Eine dysregulierte adrenerge Signalgebung unter Beteiligung von ADRA1B wird im Kontext der kardiovaskulären Physiologie, neuropsychiatrischer Phänotypen und veränderter proliferativer Signalwege in Modellsystemen untersucht.

α1B-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADRA1B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

α1B-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADRA1B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADRA1B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen α1B-AR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADRA1B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von α1B-AR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des α1B-AR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADRA1B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.