Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-S1-casein (m): sc-419847

Présentation

Csn1s1 code l’α‑S1‑caséine de souris, une phosphoprotéine majeure du lait sécrétée, synthétisée par des cellules épithéliales mammaires différenciées puis acheminée pour l’export via la voie de sécrétion RE–Golgi. En tant que composant central des micelles de caséine, l’α‑S1‑caséine contribue à l’assemblage micellaire et à la gestion du calcium/phosphate, favorisant une délivrance efficace des nutriments pendant la lactation. L’expression de Csn1s1 est fortement régulée par les hormones lactogènes et par les programmes transcriptionnels en aval de JAK2/STAT5 et dépendants de la prolactine, qui coordonnent la différenciation de la glande mammaire. Les altérations de la régulation des gènes de caséine sont utilisées comme indicateur de l’état des cellules épithéliales mammaires, des réponses au stress sécrétoire et de phénotypes associés à la lactation, pertinents pour les modèles de recherche en biologie mammaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-S1-casein (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Csn1s1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Csn1s1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Csn1s1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-S1-casein.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Csn1s1 pour l'étude de la signalisation de α-S1-casein, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Csn1s1 essentiels à la fonction de α-S1-casein
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Csn1s1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-S1-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α-S1-casein plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Csn1s1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-S1-casein plasmide HDR (m) et le α-S1-casein (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Csn1s1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Csn1s1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.