Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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α E-catenin Double Nickase Plasmid (h): sc-401151-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α E-catenin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α E-catenin Double-Nickase-Plasmid (h) und α E-catenin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTNNA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α E-catenin: sc-9988
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α E-catenin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401151-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α E-catenin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401151-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTNNA1 kodiert das menschliche αE‑Catenin, einen zentralen Bestandteil der Adherens Junctions, der Cadherin‑β‑Catenin‑Komplexe mit dem Aktinzytoskelett verbindet, um die Zell‑Zell‑Adhäsion zu stabilisieren und die kortikale Spannung zu regulieren. Durch die Koordination des Umbaus von Zellkontakten mit der Aktomyosin‑Dynamik trägt αE‑Catenin zur epithelialen Polarität, zur Gewebemorphogenese und zur kontaktabhängigen Steuerung des Zellverhaltens bei. Die Funktion von CTNNA1 überschneidet sich mit Signalwegen, die die Organisation des Zytoskeletts und die Signalübertragung an Zellkontakten steuern, einschließlich einer Wechselwirkung mit der Wnt/β‑Catenin‑Regulation an der Membran und in transkriptionellen Outputs. Eine veränderte CTNNA1‑Aktivität oder ‑Expression wurde mit Defekten in der Adhäsion und invasionsrelevanten Phänotypen in der Krebsbiologie in Verbindung gebracht, ebenso wie mit Veränderungen der epithelialen Integrität, die für entwicklungsbiologische und hämatologische Kontexte relevant sind.
α E-catenin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTNNA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTNNA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTNNA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTNNA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.