αA-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419820
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- αA-crystallin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico αA-crystallin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:αA-crystallin Anticorpo (B-2): sc-28306
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
αA-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419820 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Cryaa codifica a αA-cristalina, uma pequena proteína de choque térmico altamente abundante no cristalino ocular, que atua como chaperona molecular independente de ATP para manter a solubilidade das cristalinas e evitar a agregação proteica sob estresse. Para além do seu papel estrutural no estabelecimento da transparência do cristalino e das propriedades refrativas, a αA-cristalina contribui para a proteostase ao interagir com proteínas-clientes mal dobradas e ao modular redes de resposta ao estresse ligadas ao equilíbrio redox e à apoptose. Alterações na expressão ou na função de CRYAA estão associadas à disfunção das células das fibras do cristalino, à ruptura da homeostase proteica e a fenótipos relacionados a catarata, tornando-a um ponto-chave para estudar o desenvolvimento do cristalino e processos de agregação proteica associados ao envelhecimento. Em sistemas murinos, a perturbação de Cryaa dá suporte a estudos mecanísticos sobre atividade de chaperona, organização do citoesqueleto e resiliência ao estresse em células epiteliais e fibras do cristalino.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO αA-crystallin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cryaa em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cryaa, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cryaa na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína αA-crystallin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cryaa para a investigação da sinalização de αA-crystallin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cryaa críticos para a função αA-crystallin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cryaa para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo αA-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo αA-crystallin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cryaa. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo αA-crystallin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR αA-crystallin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cryaa para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cryaa definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.