Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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α-2M Double Nickase Plasmid (h): sc-402377-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α-2M Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α-2M Double-Nickase-Plasmid (h) und α-2M Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf A2M abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α-2M: sc-390544
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α-2M Double Nickase Plasmid (h) | sc-402377-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-2M Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402377-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
A2M kodiert das humane α-2M, einen breit wirksamen extrazellulären Proteaseinhibitor, der als Köder-und-Fallen-Molekül fungiert, um verschiedene Proteasen zu binden und zu sequestrieren sowie deren Clearance über eine LRP1-vermittelte Endozytose zu modulieren. Durch die Regulation der Proteolyse beeinflusst α-2M den Umbau der extrazellulären Matrix, das Gleichgewicht zwischen Gerinnung und Fibrinolyse sowie die inflammatorische Signalübertragung durch die Bindung von Zytokinen und Wachstumsfaktoren. Die A2M-Aktivität trägt zur systemischen Proteasehomöostase bei und wirkt sich auf Komplement- und angeborene Immunprozesse aus. Eine Dysregulation α-2M-assoziierter Signalwege wurde mit entzündlichen Erkrankungen, Leberfunktionsstörungen und neurodegenerativen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, in denen abnorme Proteaseaktivität und gestörte Proteinclearance eine Rolle spielen.
α-2M Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des A2M-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von A2M abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die A2M-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit A2M-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.