Plásmido CRISPR de Activación (h) ZPR1: sc-409727-ACT

La ZPR1 humana (proteína de dedos de zinc ZPR1) es un factor que contiene dedos de zinc y se expresa de manera ubicua; se une a receptores tirosina quinasas y se asocia con complejos de SMN para apoyar el metabolismo del ARN. Contribuye al mantenimiento de la arquitectura nuclear y al ensamblaje de ribonucleoproteínas, e influye en programas transcripcionales y procesos vinculados al ciclo celular que moldean la proliferación y las respuestas al estrés. La función de ZPR1 se cruza con vías que regulan el procesamiento de ARN y la expresión génica dependiente de señales, lo que la hace relevante para estudios de proteostasis y vulnerabilidad neuronal. La alteración de la expresión de ZPR1 se ha asociado con fenotipos relacionados con neuronas motoras y con la biología vinculada a SMN, lo que respalda la investigación de su papel en mecanismos celulares relevantes para la neurodegeneración, sin implicar resultados clínicos.

ZPR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZPR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZPR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZPR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZPR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZPR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZPR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZPR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZPR1 en células tumorales con expresión de ZPR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.