Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
ZO-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401395
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ZO-2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ZO-2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ZO-2 Anticuerpo (E-3): sc-515115
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ZO-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401395 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TJP2 codifica la proteína de andamiaje de las uniones estrechas ZO-2, un miembro de la familia MAGUK que conecta las claudinas y la ocludina con el citoesqueleto cortical de actina para sostener la integridad de la barrera epitelial y endotelial. ZO-2 también coordina el ensamblaje de las uniones con vías de señalización que regulan la polaridad y la proliferación, incluidas interacciones que influyen en la dinámica de las GTPasas Rho y en programas transcripcionales asociados a las uniones. A través de sus funciones en el control de la permeabilidad paracelular y el mantenimiento de la organización apicobasal, la alteración de la función de TJP2/ZO-2 es relevante para estudios de disfunción de la barrera y homeostasis tisular. La desregulación de componentes de las uniones estrechas como ZO-2 se investiga con frecuencia en contextos de inflamación, fibrosis y transformación epitelial, donde son prominentes la remodelación de las uniones y la pérdida de polaridad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZO-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TJP2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TJP2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TJP2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZO-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TJP2 para la investigación de la señalización de ZO-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TJP2 críticos para la función de ZO-2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TJP2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ZO-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZO-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TJP2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZO-2 (h) y el plásmido HDR ZO-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TJP2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TJP2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.