Plásmido Doble Nickase (m) ZO-1: sc-423407-NIC

El gen Tjp1 de ratón codifica la proteína de andamiaje de las uniones estrechas ZO-1 (TJP1), un miembro de la familia de las quinasas de guanilato asociadas a membrana que conecta claudinas y ocludina con el citoesqueleto cortical de actina para organizar la polaridad apical–basal y la función de barrera paracelular. ZO-1 participa en el ensamblaje y mantenimiento de las uniones estrechas, integrando señales derivadas de la dinámica del citoesqueleto regulada por las GTPasas Rho y de la mecanotransducción en las uniones, y puede influir en vías de señalización dependientes del contacto que coordinan la organización epitelial. La alteración de la localización o de la expresión de ZO-1 se utiliza con frecuencia como indicador de la integridad de las uniones estrechas en modelos de disfunción de la barrera epitelial y endotelial. En sistemas murinos, la perturbación de Tjp1 permite estudios mecanísticos de la permeabilidad, la remodelación de la barrera asociada a la inflamación y procesos del desarrollo que requieren una arquitectura de uniones precisa.

ZO-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tjp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tjp1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tjp1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tjp1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.