Plasmide Double Nickase (m) ZnT-8: sc-433687-NIC

Slc30a8 code le transporteur de zinc ZnT-8 (SLC30A8), une protéine membranaire enrichie dans les granules sécrétoires des îlots pancréatiques, qui régule l’accumulation intragranulaire de Zn²⁺ et le conditionnement hormonal dépendant du zinc. En contrôlant les flux de zinc à travers les compartiments endomembranaires, ZnT-8 influence la biogenèse des granules, la maturation de l’insuline et la dynamique de sa sécrétion, ainsi que les voies d’homéostasie cellulaire des ions métalliques. Des études génétiques et fonctionnelles associent SLC30A8/ZnT-8 à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait une cible largement utilisée pour étudier la biologie des cellules β, la signalisation du zinc et les réponses au stress dans les tissus endocrines. Dans des modèles murins, la perturbation de Slc30a8 permet une analyse mécanistique de la détection des nutriments et de la régulation de la voie sécrétoire, en lien avec des traits associés au diabète.

ZnT-8 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc30a8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc30a8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc30a8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc30a8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.