Plásmido CRISPR de Activación (h) ZNF71: sc-410081-ACT

ZNF71 codifica una proteína de dedos de zinc C2H2 que contiene un dominio KRAB, implicada en la regulación transcripcional específica de secuencia y en el control epigenético de la expresión génica. Como represor transcripcional putativo, se espera que ZNF71 interactúe con la maquinaria de remodelación de cromatina asociada a KRAB/KAP1 (TRIM28), influyendo en la formación de heterocromatina y en programas de silenciamiento transcripcional que configuran la identidad celular y estados transcripcionales sensibles al estrés. La regulación alterada de factores de transcripción con dedos de zinc se vincula con frecuencia a una diferenciación desregulada, a la estabilidad genómica y a redes transcripcionales oncogénicas, lo que hace que ZNF71 sea relevante para estudios de los circuitos de regulación génica. En sistemas humanos, investigar la expresión de ZNF71 y sus efectos transcripcionales aguas abajo respalda el trabajo mecanístico sobre la modulación de vías dependiente de la cromatina y sobre firmas transcripcionales asociadas a enfermedades.

ZNF71 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF71 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZNF71 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF71 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF71, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZNF71. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF71 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZNF71 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZNF71 en células tumorales con expresión de ZNF71 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.