ZNF136 Double Nickase Plasmid (h): sc-411093-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ZNF136 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ZNF136 Double-Nickase-Plasmid (h) und ZNF136 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ZNF136 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ZNF136: sc-81133
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ZNF136 Double Nickase Plasmid (h) | sc-411093-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZNF136 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411093-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZNF136 kodiert ein C2H2-Zinkfingerprotein mit KRAB-Domäne, das an sequenzspezifische DNA-Bindung und transkriptionelle Repression beteiligt ist, indem es Corepressor-Komplexe rekrutiert. Als Teil von Zinkfinger-Regulationsnetzwerken wird erwartet, dass ZNF136 den Chromatinzustand und Genexpressionsprogramme beeinflusst, die Zelldifferenzierung, Proliferation und stressresponsive Transkription koordinieren. Eine Dysregulation der durch KRAB-ZNF vermittelten Stilllegung wurde in unterschiedlichen Krankheitskontexten mit veränderter epigenetischer Kontrolle und erhöhter Transkriptionsvarianz in Verbindung gebracht, was ZNF136 für Studien zur Stabilität der Genregulation interessant macht. Die funktionelle Untersuchung von ZNF136 unterstützt mechanistische Arbeiten zur Transkriptionskontrolle, zu chromatinassoziierten Signalwegen und zu nachgelagerten Effekten auf zelluläre Phänotypen, die für die biomedizinische Forschung relevant sind.
ZNF136 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ZNF136-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ZNF136 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ZNF136-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ZNF136-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.