Plásmido CRISPR de Activación (h) ZIP7: sc-409465-ACT

SLC39A7 codifica ZIP7, un transportador de zinc localizado en el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi que regula la liberación de Zn2+ al citosol para mantener la homeostasis de iones metálicos. Al controlar la actividad enzimática y las señales dependientes de zinc, ZIP7 influye en procesos que incluyen el plegamiento de proteínas en la vía secretora, las respuestas al estrés del RE y las cascadas de fosforilación vinculadas a la proliferación y la supervivencia. La alteración del flujo de zinc mediado por ZIP7 se ha asociado con cambios en la señalización de factores de crecimiento y una adaptación desregulada al estrés celular en múltiples contextos patológicos, incluidas vías relacionadas con el cáncer. Como nodo central en la señalización del zinc, ZIP7 se estudia con frecuencia por su impacto en programas transcripcionales, la proteostasis y la reprogramación metabólica.

ZIP7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC39A7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZIP7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC39A7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC39A7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZIP7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC39A7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZIP7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZIP7 en células tumorales con expresión de SLC39A7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.