ZIP7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409465-ACT

SLC39A7 codifica o ZIP7, um transportador de zinco localizado no retículo endoplasmático e no complexo de Golgi que regula a liberação de Zn2+ para o citosol, a fim de manter a homeostase de íons metálicos. Ao controlar a atividade e a sinalização de enzimas dependentes de zinco, o ZIP7 influencia processos como o dobramento de proteínas na via secretória, as respostas ao estresse do RE e cascatas de fosforilação ligadas à proliferação e à sobrevivência. Alterações no fluxo de zinco mediado pelo ZIP7 têm sido associadas a mudanças na sinalização de fatores de crescimento e à desregulação da adaptação ao estresse celular em múltiplos contextos de doença, incluindo vias relacionadas ao câncer. Como um nó central na sinalização por zinco, o ZIP7 é frequentemente estudado pelo seu impacto em programas transcricionais, na proteostase e na reprogramação metabólica.

ZIP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC39A7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZIP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC39A7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC39A7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZIP7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC39A7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZIP7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZIP7 em células tumorais com expressão de SLC39A7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.