Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZFYVE28 (h): sc-412894

Présentation

ZFYVE28 code une protéine contenant un domaine FYVE qui reconnaît le phosphatidylinositol 3‑phosphate sur les membranes endosomales, établissant un lien entre la signalisation des phosphoinositides et le trafic membranaire ainsi que le tri des protéines. Par ses interactions avec des composants de la machinerie endocytaire, ZFYVE28 contribuerait à la régulation de l’internalisation des récepteurs, de la maturation des endosomes et de l’organisation spatiale des complexes de signalisation. Ces processus s’entrecroisent avec des voies qui contrôlent le renouvellement des récepteurs aux facteurs de croissance et la dynamique de la signalisation en aval, ce qui fait de ZFYVE28 une cible pertinente pour l’étude de l’atténuation du signal et du transport vésiculaire. La dérégulation du trafic endosomal et du tri dépendant des phosphoinositides est associée à des altérations de l’homéostasie cellulaire et a été impliquée dans divers contextes liés aux maladies, notamment des phénotypes prolifératifs et neurobiologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZFYVE28 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZFYVE28 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZFYVE28, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZFYVE28 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZFYVE28.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZFYVE28 pour l'étude de la signalisation de ZFYVE28, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZFYVE28 essentiels à la fonction de ZFYVE28
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZFYVE28 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZFYVE28 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZFYVE28 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZFYVE28. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZFYVE28 plasmide HDR (h) et le ZFYVE28 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZFYVE28 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZFYVE28 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.