ZFR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407242-ACT

Das humane ZFR (Zinkfinger‑RNA‑bindendes Protein) ist ein überwiegend nukleärer RNA‑bindender Faktor, der an der posttranskriptionellen Genregulation beteiligt ist, einschließlich der Modulation des Prä‑mRNA‑Spleißens und der RNA‑Prozessierung durch Interaktionen mit spliceosomalen und Ribonukleoprotein‑Komplexen. Indem ZFR die Nutzung von Transkript‑Isoformen und das Schicksal von RNA mitbestimmt, kann es zelluläre Zustandsprogramme wie Proliferation, Differenzierung und stressresponsive Genexpression beeinflussen. Eine dysregulierte RNA‑Prozessierung ist ein häufiges Merkmal von Krebs sowie neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Erkrankungen, was ZFR zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zu RNA‑regulatorischen Netzwerken macht. Die Untersuchung der ZFR‑Funktion kann dazu beitragen zu klären, wie spleißassoziierte Signalwege und RNA‑bindende Proteine die Genexpressionsausgaben in menschlichen Zellen koordinieren.

ZFR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZFR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZFR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZFR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZFR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZFR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZFR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZFR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZFR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZFR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.