Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZFP57: sc-404270-ACT

Le gène humain ZFP57 code une protéine à doigts de zinc de type KRAB qui se lie à l’ADN méthylé au niveau des régions de contrôle de l’empreinte génomique et recrute KAP1/TRIM28 ainsi que des modificateurs de la chromatine associés afin de préserver la méthylation de l’ADN et des marques d’histones répressives au cours du développement précoce. Grâce à cette fonction de maintenance épigénétique, ZFP57 soutient l’empreinte génomique, la régulation allélique spécifique de l’expression génique et une répression transcriptionnelle stable à certains loci. La perturbation des programmes d’empreinte dépendants de ZFP57 est associée à des profils de méthylation anormaux et à une dérégulation du développement, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des troubles de l’empreinte et de la stabilité de l’épigénome. ZFP57 est donc largement utilisé comme facteur modèle pour explorer la maintenance de la méthylation de l’ADN, la répression médiée par KRAB et les voies de remodelage de la chromatine.

ZFP57 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZFP57 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZFP57 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZFP57 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZFP57, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZFP57. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZFP57 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZFP57 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZFP57 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZFP57 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.